一、石蠟切片

1??烤片

將石蠟切片按同一朝向放置在切片架上，將其放入55℃的恒溫箱中烤片30分鐘；同時(shí)將脫蠟液1缸一起放入55℃的恒溫箱中；

2??脫蠟至水

將石蠟切片連同切片架一起放入脫蠟液1缸中,再一起從恒溫箱中取出置于常溫，5分鐘后，將切片取出浸入到常溫脫蠟液2缸中，并按照脫蠟液2、脫蠟液3、無水乙醇1、無水乙醇2、無水乙醇3也可以選擇梯度濃度乙醇的順序依次將石蠟切片放入缸中，每缸5分鐘；用流水清洗切片5分鐘；

3??抗原修復(fù)

在高壓鍋中，加入抗原修復(fù)液，高火預(yù)熱；待修復(fù)液沸騰后將切片置于其中，并完全浸泡組織，蓋好鍋蓋，扣上壓力閥，高火繼續(xù)加熱；

待限壓閥開始轉(zhuǎn)動(dòng)噴氣后調(diào)至中火，同時(shí)開始計(jì)時(shí)2分鐘；計(jì)時(shí)結(jié)束后離開熱源，自然降壓后將高壓鍋移入冷水中緩慢冷卻。待修復(fù)液溫度降至室溫后，用緩沖液PBS洗滌3次，每次1min。

6大技巧總結(jié)及注意事項(xiàng)

?流水清洗時(shí)水流不能直接對(duì)著切片；

?操作過程中需一直保持切片處于濕潤狀態(tài)；

?修復(fù)液需完全浸沒切片上組織；

?修復(fù)過程中嚴(yán)禁打開儀器或中斷運(yùn)行程序；

?修復(fù)完成后避免快速冷卻；

?修復(fù)液可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求自行選用修復(fù)液。

二、冰凍切片

1??樣本在OCT包埋液中進(jìn)行速凍（OCT的配方針對(duì)Optimal Cutting Temperature進(jìn)行了優(yōu)化）；

2??冰凍塊固定在組織卡盤（chuck）中，并固定在切片組件上；

3??切片厚度為10-20μm，逐片收集；

4??擦去多余的OCT，用組化筆勾畫組織的疏水邊界。

注意事項(xiàng)

?切片晾干10-15min，以防止切片在后續(xù)洗滌步驟中脫片。

文章出自：免疫熒光組織切片實(shí)驗(yàn)      想了解更多請(qǐng)關(guān)注：http://bjzjay.cn/