病理組織石蠟包埋和切片是病理學(xué)中常用的技術(shù)，用于制備組織樣本以供顯微鏡下觀察以下是步驟及注意事項:

石蠟包埋步驟

1.取材和固定:

取材:從病變部位切取適量組織。固定:將組織放入 10%的中性緩沖甲醛溶液中固定12-24 小時，防止組.織腐敗和自溶。

2.脫水:

將固定好的組織依次放入不同濃度的乙醇溶液(70%、80%、90%、95%.

100%)中，每級脫水 30 分鐘到1小時。

3.透明:

將脫水后的組織放入二甲苯或甲苯中，透明化處理，使組織中的水分和乙醇完全被替代。

4浸蠟:

將透明后的組織放入液態(tài)石蠟中，浸泡 2-3次，每次 30 分鐘到1小時石蠟溫度應(yīng)保持在 56-60℃。

5.包埋:

往包埋盒中加少許蠟液，將浸蠟后的組織放入石蠟包埋盒中間位置，確保組織最大面或者指定處面向包埋盒底部并浸沒在蠟液中，用融化的石蠟澆鑄并使其冷卻凝固，形成石蠟塊。

切片步驟

1.修塊:

將石蠟塊邊緣多余的石蠟修掉，確保切片表面平整。

2.切片:

使用石蠟切片機將石蠟塊切成 3-5 微米厚的薄片。

3.展片

將切好的薄片放在 40-45℃的溫水中展平，然后將其撈出，貼在載玻片上。

4.烤片:

將載玻片放入60℃的烤箱中烤片30分鐘至1小時，使切片充分粘附在載玻片上并去除多余水分。

注意事項

固定時間:固定液可以穩(wěn)定細胞內(nèi)的蛋白質(zhì)和其他生物大分子，防止它們在處理、儲存或觀察過程中發(fā)生降解或變形，應(yīng)當(dāng)確保固定時間充分，防止組織自溶影響后續(xù)處理效果。

脫水和透明:每級處理時間應(yīng)足夠，避免組織中殘留水分或乙醇，影響浸蠟效

果。

浸蠟溫度:石蠟可以完全替代組織中的所有溶劑，可以進一步固定組織的形態(tài)保持石蠟溫度恒定，防止溫度過高導(dǎo)致組織過度收縮或變形。

切片厚度:切片厚度應(yīng)均勻，過厚或過薄都可能影響顯微鏡下觀察效果。

展片溫度:水溫過高會使蠟片融化，過低會導(dǎo)致蠟片皺縮，影響切片展平效果適宜的溫度應(yīng)保持在 40-45℃。

烤片時間:烤片時間應(yīng)充分，確保切片牢固粘附在載玻片上。

個人防護:實驗人員應(yīng)全程佩戴口罩、手套，實驗過程中避免被燙傷、割傷

1. 固定問題

問題:組織未完全固定，導(dǎo)致形態(tài)失真或細胞結(jié)構(gòu)不清晰。

處理辦法:

確保使用合適的固定液(如 10%的中性福爾馬林)并遵循固定時間。

固定時間要足夠長，通常 24 小時以上，具體時間視組織大小而定。

2.脫水問題

問題:組織脫水不完全或過度脫水，導(dǎo)致組織收縮或硬化。

處理辦法:

使用逐步增濃的酒精系列(從 70%到 100%)進行脫水，每步脫水時間適中。

確保每個脫水步驟時間足夠，但不過度延長，避免組織過度收縮。

3.透明化問題

問題:透明化不完全，組織在石蠟中無法充分浸潤。

處理辦法:

透明化時使用新鮮的二甲苯或替代品，確保組織透明徹底，

延長透明化時間，尤其是較大的組織塊。

4.包埋問題

問題:包埋不良，石蠟塊中有氣泡或石蠟不均勻。

處理辦法:

包埋前確保石蠟完全溶化，溫度適中(約 60°C)。輕輕震動或使用真空設(shè)備去除氣泡

5.切片問題

問題:切片破裂、皺折或厚薄不均。

處理辦法:

確保切片刀鋒利，切割角度合適

調(diào)整切片厚度(通常在 3-5 微米之間)以適應(yīng)不同組織的需要。

切片前將石蠟塊在冰上輕微冷凍，使組織更加堅硬。

6.染色問題

問題:染色不均或染色不充分，

處理辦法:

確保染色液新鮮并按照標準操作程序進行染色，

對染色步驟進行時間控制，確保每步染色時間一致。

7.組織脫片

問題:組織從載玻片上脫落

處理辦法:

載玻片進行適當(dāng)處理，如涂覆黏附劑(如 APES 或明膠)。

確保組織貼附后充分干燥再進行后續(xù)處理。

文章出自：組織石蠟包埋和切片    想了解更多請關(guān)注：http://bjzjay.cn/