1 、取材固定：離心收集細(xì)胞或細(xì)菌沉淀，要求沉淀最少綠豆大小。去培養(yǎng)基加入電鏡固定 液 4℃重懸混勻固定 2-4h ，4℃固定保存及運(yùn)輸。

2 、瓊脂預(yù)包埋：細(xì)胞或細(xì)菌用離心機(jī)離心，棄上清加入 0. 1M 磷酸緩沖液 PB（PH7.4） ， 混勻漂洗 3min 后再離心，重復(fù)洗滌 3 次。提前加熱溶解制備 1%瓊脂糖溶液，稍冷卻后加 入 EP 管內(nèi)，在瓊脂糖凝固之前將沉淀用鑷子挑起懸浮包裹于瓊脂糖內(nèi)。

3 、后固定：0. 1M 磷酸緩沖液 PB（PH7.4）配制的 1%鋨酸避光室溫固定 2h 。0. 1M 磷酸緩 沖液 PB（PH7.4）漂洗 3 次，每次 15min。

4 、室溫脫水：組織依次入 30%-50%-70%-80%-95%- 100%- 100%酒精上行脫水每次 20min， 100%丙酮兩次，每次 15min。

5 、滲透包埋：丙酮︰812 包埋劑=1︰1 37℃ 2-4h ， 丙酮︰812 包埋劑=1︰2 37℃滲透過夜， 純 812 包埋劑 37℃ 5-8h。將純 812 包埋劑倒入包埋板，將樣品插入包埋板后 37℃烤箱過夜。

6 、聚合：包埋板放于 60℃烤箱聚合 48h ，取出樹脂塊備用。

7 、超薄切片：樹脂塊于超薄切片機(jī) 60-80nm 超薄切片，150  目方華膜銅網(wǎng)撈片。

8 、染色：銅網(wǎng)于 2%醋酸鈾飽和酒精溶液避光染色 8min；70%酒精清洗 3 次；超純水清洗 3 次；2.6%枸櫞酸鉛溶液避二氧化碳染色 8min；超純水清洗 3 次，濾紙稍吸干。銅網(wǎng)切片放 入銅網(wǎng)盒內(nèi)室溫干燥過夜。

9 、透射電子顯微鏡下觀察，采集圖像分析。

文章出自：投射電鏡實(shí)驗(yàn)    想了解更多請(qǐng)關(guān)注：http://bjzjay.cn/