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服務(wù)介紹:
用熒光抗體示蹤或檢查相應(yīng)抗原的方法稱熒光抗體法;用已知的熒光抗原標記物示蹤或檢查相應(yīng)抗體的方法稱熒光抗原法。這兩種方法總稱免疫熒光技術(shù),因為熒光色素不但能與抗體球蛋白結(jié)合,用于檢測或定位各種抗原,也可以與其他蛋白質(zhì)結(jié)合,用于檢測或定位抗體,但是在實際工作中熒光抗原技術(shù)很少應(yīng)用,所以人們習(xí)慣稱為熒光抗體技術(shù),或稱為免疫熒光技術(shù)。以熒光抗體方法較常用。用免疫熒光技術(shù)顯示和檢查細胞或組織內(nèi)抗原或半抗原物質(zhì)等方法稱為免疫熒光細胞(或組織)化學(xué)技術(shù)。
該技術(shù)的主要特點是:特異性強、敏感性高、速度快。主要缺點是:非特異性染色問題尚未完全解決,結(jié)果判定的客觀性不足,技術(shù)程序也還比較復(fù)雜。
熒光免疫法按反應(yīng)體系及定量方法不同,還可進一步分做若干種。與放射免疫法相比,熒光免疫法無放射性污染,并且大多操作簡便,便于推廣。國外生產(chǎn)的TDM用試劑盒,有相當(dāng)一部分即屬于此類,并且還有專供TDM熒光偏振免疫分析用的自動分析儀生產(chǎn)。
技術(shù)原理:
免疫學(xué)的基本反應(yīng)是抗原-抗體反應(yīng)。由于抗原抗體反應(yīng)具有高度的特異性,所以當(dāng)抗原抗體發(fā)生反應(yīng)時,只要知道其中的一個因素,就可以查出另一個因素。免疫熒光技術(shù)就是將不影響抗原抗體活性的熒光色素標記在抗體(或抗原)上,與其相應(yīng)的抗原(或抗體)結(jié)合后,在熒光顯微鏡下呈現(xiàn)一種特異性熒光反應(yīng)。
實驗步驟:
實驗結(jié)果展示:
常見問題:
無/弱染色?
烤片溫度過高,推薦56℃-60℃1-2h;
一抗是否適用固定液和石蠟切片,使用濃度是否過低,孵育是否時間過短等。
非特異性背景染色?
是否滅活內(nèi)源性過氧化物酶;
孵育過程中干片;
抗原熱修復(fù)過度。
染色過深?
一抗?jié)舛冗^高;
染色試濃度過高或孵育時間過長;
染色劑濃度過高或孵育時間過長
送樣運輸要求:
1、冰凍切片-20℃保存和運輸;
2、石蠟切片常溫運輸至實驗室;
3、細胞爬片用固定液浸泡,4℃保存和運輸。