尼羅紅熒光染色溶液是一種旨在通過(guò)與脂類物質(zhì)的結(jié)合并發(fā)出熒光檢測(cè)信號(hào)，快速、敏感、可靠地活體定量測(cè)定細(xì)胞內(nèi)脂類成分的常用熒光染料。適用于各種細(xì)胞包括細(xì)菌細(xì)胞，也用于蛋白質(zhì)電泳染色。產(chǎn)品嚴(yán)格無(wú)菌，即到即用，性能穩(wěn)定，著色清晰靈敏。

尼羅紅染色劑是一種親脂性的惡嗪類熒光染料。與脂類物質(zhì)包括臘酯（wax ester）和三酰甘油（triacylglycerol）以及各種脂肪酸結(jié)合后，在激發(fā)波長(zhǎng)543nm的激發(fā)下，顯示強(qiáng)烈桔紅色熒光（散發(fā)波長(zhǎng)598nm）。同時(shí)在紫外光的照射下顯示紅色。

實(shí)驗(yàn)開始前，將試劑盒里的染色液（Reagent A）凍融，置入冰槽里。然后進(jìn)行下列操作。

1． 開啟熒光顯微鏡或熒光分光光度儀

2． 小心抽掉25cm2細(xì)胞培養(yǎng)瓶里的培養(yǎng)液

3． 加入3毫升用戶自備的HANK平衡鹽緩沖溶液或PBS緩沖溶液到細(xì)胞培養(yǎng)瓶，覆蓋培養(yǎng)瓶表面

4． 小心抽掉清洗液，加入1毫升用戶自備的胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液，鋪滿整個(gè)培養(yǎng)平面

5． 置入37℃培養(yǎng)箱1分種

6． 振動(dòng)培養(yǎng)瓶，使細(xì)胞脫落，加入5毫升用戶自備的完全細(xì)胞培養(yǎng)液

7． 移入15毫升錐形離心管，放進(jìn)臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘，速度為300g

8． 小心抽去上清液，加入1毫升用戶自備的HANK平衡鹽緩沖溶液或PBS緩沖溶液，充分混勻

9． 移入到新的1.5毫升離心管

10． 加入xx微升染色液（Reagent A）到離心管，用手指輕輕彈動(dòng)離心管，使其充分混勻

11． 在37℃培養(yǎng)箱孵育10分鐘，避免光照

12． 放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心30秒，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）

13． 小心抽去上清液，加入1毫升用戶自備的HANK平衡鹽緩沖溶液或PBS緩沖溶液，充分混勻

14． （選擇步驟）放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心30秒，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）

15． （選擇）小心抽去上清液，加入1毫升用戶自備的HANK平衡鹽緩沖溶液或PBS緩沖溶液，充分混勻

16． 熒光顯微鏡觀察

1） 移出10微升離心管中的混勻物到載玻片上

2） 放上蓋玻片或封片

3） 在熒光顯微鏡下觀察熒光細(xì)胞

文章出自：尼羅紅染色實(shí)驗(yàn)     想了解更多請(qǐng)關(guān)注：http://bjzjay.cn/