①原理

高爾基染色包括銀 Golgi 染色和汞 Golgi 染色技術(shù)。

銀 Golgi 染色原理:

浸泡腦組織的重鉻酸鉀溶液與硝酸銀溶液發(fā)生反應(yīng)，生成黑色的鉻酸銀沉淀，由于組織的嗜銀性而沉積于神經(jīng)細胞中。銀高爾基技術(shù)主要有兩種被廣泛應(yīng)用:快速 Golgi 法和 Golgi- Kopsch 法。

汞 Golgi 染色原理:

由于銀 Golgi染色存在一定缺陷，Cox 對高爾基技術(shù)進行改進，被稱為「Golgi-Cox 法」。使用重鉻酸鉀和氣化汞的混合物，并加入鉻酸鉀來調(diào)節(jié)溶液酸性的反應(yīng)。Golgi-Cox 染色的化學(xué)性質(zhì)尚未完全了解;Golgi-Cox 浸漬的神經(jīng)細胞在堿化作用下形成的黑色沉積物被認為是黑色硫化汞和一些金屬的復(fù)雜氧化物。

②用途

高爾基法能夠發(fā)現(xiàn)動物大腦的神經(jīng)細胞因藥物處理或神經(jīng)系統(tǒng)疾病引起的樹突和樹突棘微小形態(tài)改變，觀察神經(jīng)發(fā)育，死亡，傳遞等方面區(qū)別。如阿爾茨海默病檢測腦組織神經(jīng)細胞形態(tài)改變記憶學(xué)習(xí)記憶的影響。

尼氏染色法(Nissl staining):

優(yōu)點:

操作簡便，實驗成本低;

不足:

中腦對神經(jīng)元進行數(shù)量統(tǒng)計，觀察是否有神經(jīng)元丟失。不能觀察樹突或樹突棘的變化。

③材料與儀器

儀器:

3D 掃描儀掃描或正置顯微鏡(含拍照系統(tǒng))

材料:

動物及死后人類腦組織

4%(w/v) 多聚甲醛、異戊烷、干冰

丙烯基紫羅蘭溶液

50%/75%/95%/100% 乙醇、二甲苯封片劑、刀片、染色缸、低溫保持器凝膠涂層顯微鏡載玻片、吸管、濾紙

蓋玻片、FD 快速高爾基染色試劑盒

④步驟

本次實驗步驟以優(yōu)化的 Golgi-cox 技術(shù)為例:

1.提前24h將試劑盒中的溶液A和B混勻:

2.將小鼠腦組織取出后用干凈的PBS沖洗后，置于A和B的混合液中，在室溫下避光保存。浸泡6h以后或次日更換新的浸漬液，在室溫下避光保存2周(每個腦組織至少用2mL浸泡液):

⑤注意事項

1.本實驗樣品使用新鮮或短期固定的腦組織。不推薦使用已經(jīng)進行福爾馬林固定或新鮮冷凍的腦組織;

2.對于體積較大的腦部樣本(如大鼠腦組織)需用鋒利的刀片切成大約 10mm厚的塊狀;

3.溶液A和溶液B的混合液至少提前 24h配制且不能攪拌:

4.步驟2中，在腦組織浸泡期間每周兩次對裝有組織的容器可輕輕地左右旋渦(一定不要晃動!)幾秒鐘:

5.溶液A和B含有重金屬,接觸皮膚是有毒的，如果吞咽可能是致命的。實驗操作時，一定要穿戴防護服、手套等防護用具，在化學(xué)通風(fēng)櫥中完成。溶液A和B的廢棄物要專門收集起來，統(tǒng)一由專業(yè)部門處置;

6.用 Golgi 染色的切片應(yīng)避光保存

⑥常見問題

1. 背景顏色深:

可能原因是溶液A和B沒有提前24h配置或腦組織在A和B混合液中浸泡時間過長，超過 14天。

2.出現(xiàn)陰性結(jié)果:

可能是因為將動物進行灌注后再取腦進行實驗。

3.高爾基染色不深:

可能原因腦組織在A和B混合液中染色時間完全不足14 天或是因為液體太少沒有完全浸潤腦組織或是試劑過期。

文章出自：高爾基染色實驗    想了解更多請關(guān)注：http://bjzjay.cn/