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H&E染色,全稱為蘇木精-伊紅染色(Hematoxylin and Eosin staining),是病理學(xué)中最常用的染色方法之一。這種染色方法可以清晰地顯示組織的形態(tài)結(jié)構(gòu)和某些病理變化。H&E染色的原理主要涉及到染色劑和組織中的生物大分子(如蛋白質(zhì))之間的化學(xué)反應(yīng)。蘇木精是一種堿性染色劑,主要與含有酸性基團(tuán)的組織成分(如DNA和RNA)結(jié)合,使其呈現(xiàn)藍(lán)紫色。伊紅是一種酸性染色劑,主要與含有堿性基團(tuán)的組織成分(如膠原纖維和肌纖維)結(jié)合,使其呈現(xiàn)粉紅色。
實(shí)驗(yàn)步驟:
1. 切片脫蠟:將包埋在石蠟中的組織切片放入兩個(gè)裝有二甲苯的容器中,每個(gè)容器中浸泡10分鐘。這一步是為了去除切片中的石蠟。
2. 酒精脫脂:將切片轉(zhuǎn)移到兩個(gè)裝有100%酒精的容器中,每個(gè)容器中浸泡10分鐘。這一步是為了去除切片中的脂肪。
3. 酒精水化:將切片依次轉(zhuǎn)移到裝有95%酒精、70%酒精和50%酒精的容器中,每個(gè)容器中浸泡5分鐘。這一步是為了使切片逐步水化。
4. 清水洗滌:將切片轉(zhuǎn)移到裝有清水的容器中,浸泡5分鐘。
5. 蘇木精染色:將切片轉(zhuǎn)移到裝有蘇木精染色液的容器中,浸泡5-10分鐘。
6. 清水洗滌:將切片轉(zhuǎn)移到裝有清水的容器中,浸泡1-2分鐘。
7. 伊紅染色:將切片轉(zhuǎn)移到裝有伊紅染色液的容器中,浸泡1-2分鐘。
8. 酒精脫色:將切片依次轉(zhuǎn)移到裝有95%酒精和100%酒精的容器中,每個(gè)容器中浸泡5分鐘。
9. 二甲苯透明:將切片轉(zhuǎn)移到裝有二甲苯的容器中,浸泡10分鐘。這一步是為了使切片變得透明。
10. 封片:將切片和封片用封片膠粘合,然后在顯微鏡下觀察。
實(shí)驗(yàn)常見問題和措施:
1. 染色不均:可能是由于切片上的脂肪或蠟沒有完全去除造成的。在染色前應(yīng)確保切片充分脫蠟。
2. 染色過深或過淺:可能是染色時(shí)間過長或過短,或者染色液的濃度不適當(dāng)。應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況調(diào)整染色時(shí)間和染色液的濃度。
3. 切片脫落:可能是切片固定不牢或處理過程中力度過大。應(yīng)確保切片的固定牢固,處理過程中要輕柔。
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